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由于細(xì)胞壁等因素的限制，植物的單細(xì)胞研究要稍晚于動(dòng)物領(lǐng)域，目前植物單細(xì)胞文章主要是針對(duì)少量單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組異質(zhì)性的研究，高通量水平還未應(yīng)用到植物領(lǐng)域。2019年2月4日，美國密歇根大學(xué)John Schiefelbein實(shí)驗(yàn)室在線發(fā)表了擬南芥高通量單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組（scRNA）研究文章，發(fā)表雜志為Plant Physiology（IF=5.949），這也是篇將10x Genomics scRNA測(cè)序應(yīng)用在植物中的發(fā)表文獻(xiàn)。

植物10x Genomics scRNA-seq一個(gè)很大的限制因素是無法獲得高活力的原生質(zhì)體，下面給出了上述文獻(xiàn)中擬南芥根組織原生質(zhì)體的制備流程，供參考，實(shí)際操作時(shí)需要根據(jù)研究的組織類型，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化，例如解離酶的選擇、解離酶的處理時(shí)間等。

1、溶液準(zhǔn)備

清洗液：0.4 mM （Mannitol）、20mM MES (pH 5.7)、20 mM KCl、10mM CaCl2、0.1% (w/v) BSA；

酶解液：1.25% (w/v) 纖維素酶Cellulase("ONOZUKA" R-10, Yakult)、0.1% (w/v)果膠酶Pectolyase (P-3026, Sigma-Aldrich)、0.4 mM Mannitol、20mM MES (pH 5.7)、20 mM KCl、10mM CaCl2、0.1% (w/v) BSA。

2、原生質(zhì)體懸液制備

1）  取擬南芥根尖，切碎，70-μm濾器過濾；

2）  置于35 mm培養(yǎng)皿中，加入酶解液；

3）  放入恒溫?fù)u床（85 rpm），25°C酶解1h；

4）  500 g 離心10 min；

5）  離心，加入500 μL清洗液洗滌；

6）  40μm細(xì)胞濾器過濾原生質(zhì)體懸液后，200g離心 6 min；

7）  清洗液重懸，確定原生質(zhì)體濃度，冰上放置，可進(jìn)行10x上機(jī)標(biāo)記。